Ферменты рестрикции

допустим, у нас есть плазмида с сайтом рестрикции BglII (5’-A *GATCT-3’), и ещё ген интереса в линейной днк, который с двух сторон окружён сайтами рестрикции BamHI (5’-G *GATCC-3’).


и если обработать плазмиду с BglII, а ген интереса с BamHI, и потом поместить их в раствор с лигазой, то скорее всего липкие концы смогут соединиться, из-за их схожести.

но тут возникает вопрос, после того, как эти липкие концы соединились, их можно снова разрезать с помощью тех же ферментов (BglII и BamHI)?

Так как BgIII и BamHI являются type II restriction enzymes, то обязательно чтобы последовательность была палиндромной для разреза. В данном случае, при лигации получаются последовательности не палиндромные, поэтому лигированная плазмида не может быть порезана ни BgIII, ни BamHI.

2 симпатии

а сайты рестрикции BgIII и BamHI уже палиндромные до разреза и лигации?

1 симпатия

Да, палиндромные
изображение
изображение

3 симпатии
© 2021 Общественный Фонд «Beyond Curriculum» (CC BY-NC-SA 4.0 International)